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　　NanoDrop 2000分光光度計(jì)比耳定律成立的前提條件是人射光是單色光，但是精度再高的儀器，即使是雙單色器的分光光度計(jì)，也只能獲得近乎單色的光，無(wú)法獲得純單色光，它仍然含有狹窄光通帶，具有復(fù)色光的性質(zhì)。而復(fù)色光會(huì)導(dǎo)致比耳定律的正或負(fù)偏離。

 

　　固定狹縫的紫外分光光度計(jì)光譜帶寬一般為1nm或2nm，可調(diào)狹縫的可以做到0.1nm；可見(jiàn)分光光度計(jì)帶寬6nm、snm，甚十幾納米。

 

　　光譜帶寬應(yīng)該是越小越好，但是，隨著光譜分辨率的提高，儀器的靈敏度降低，所以，選擇儀器時(shí)要綜合考慮各種條件的影響。當(dāng)溶液濃度較小且單色光較純時(shí)，可近似認(rèn)為符合比耳定律。

 

　　2.雜散光的影響

 

　　雜散光是指進(jìn)人檢測(cè)器的處于待測(cè)波長(zhǎng)光譜帶寬范圍外的其他波長(zhǎng)組分，它是光譜測(cè)量中誤差的主要來(lái)源。

 

　　NanoDrop 2000分光光度計(jì)產(chǎn)生原因有：

 

　　分光光度計(jì)的色散元件、反射鏡、透鏡及單色器內(nèi)壁灰塵等。在分光光度計(jì)工作波段邊緣波長(zhǎng)處，由于單色器透光率、光源輻射強(qiáng)度、檢測(cè)器靈敏度都較低，雜散光的影響更為顯著。

 

　　雜散光限制儀器的分析上限可引起嚴(yán)重的測(cè)量誤差，實(shí)際工作中，在定量分析時(shí)，一般在吸收峰或其附近處測(cè)量樣品吸光度，如果在分析波長(zhǎng)處含有雜散光，這時(shí)樣品的透光率較小，而雜散光大部分透過(guò)，使測(cè)量吸光度低于真實(shí)吸光度。

 

　　3.儀器噪聲對(duì)測(cè)t的影響

 

　　NanoDrop 2000分光光度計(jì)噪聲也是儀器的一個(gè)重要指標(biāo)，它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測(cè)量的分析信號(hào)中的不需要的信號(hào)，掃描100%T和0%T線，可觀察到分光光度計(jì)的噪聲水平，如果儀器噪聲較大，會(huì)掩蓋較小的測(cè)量信號(hào)，一般用噪音的二倍來(lái)表示儀器的靈敏度。

 

　　4.波長(zhǎng)和吸光度準(zhǔn)確度

 

　　樣品的每一個(gè)值都是在一定的波長(zhǎng)下測(cè)得的，如果，波長(zhǎng)誤差很大，測(cè)出的值肯定不準(zhǔn)。吸光度準(zhǔn)確度也是用戶對(duì)儀器的直接要求，更應(yīng)引起足夠的重視。

 

　　國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程規(guī)定NanoDrop 2000分光光度計(jì)透射比準(zhǔn)確度為*士0.6%， B級(jí)土1.0%。

 

　　NanoDrop one分光光度計(jì)作為一種精密儀器，在運(yùn)行工作過(guò)程中由于工作環(huán)境，操作方法等種種原因，其技術(shù)狀況必然會(huì)發(fā)生某些變化，可能影響設(shè)備的性能，甚誘發(fā)設(shè)備故障及事故。因此，分析工作者必須了解分光光度計(jì)的基本原理和使用說(shuō)明，并能及時(shí)發(fā)現(xiàn)和排除這些隱患，對(duì)已產(chǎn)生的故障及時(shí)維修才能保證儀器設(shè)備的正常運(yùn)行。

 

　　1、若大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng)，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100%”點(diǎn)。然后再測(cè)量。

 

　　2、指針式儀器在未接通電源時(shí)，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。

 

　　3、比色皿使用完畢后，請(qǐng)立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。

 

　　4、操作人員不應(yīng)輕易動(dòng)燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。

 

　　5、NanoDrop one分光光度計(jì)，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點(diǎn)是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測(cè)微弱光電信號(hào)，而不能用來(lái)檢測(cè)強(qiáng)光。否則容易產(chǎn)生信號(hào)漂移，靈敏度下降。針對(duì)其上述特點(diǎn)，在維修、使用此類儀器時(shí)應(yīng)注意不讓光電倍增管長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下，因此在預(yù)熱時(shí)，應(yīng)打開(kāi)比色皿蓋或使用擋光桿，避免長(zhǎng)時(shí)間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。

 

　　6、放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零。

 

　　7、比色杯的配套性問(wèn)題。比色杯必須配套使用，否則將使測(cè)試結(jié)果失去意義。在進(jìn)行每次測(cè)試前均應(yīng)進(jìn)行比較。具體方法如下；分別向被測(cè)的兩只杯子里注入同樣的溶液，把1600便攜式分光光度計(jì)置于某一波長(zhǎng)處，石英比色杯；220nm、700nm裝蒸餾水，玻璃比色杯：700nm處裝蒸餾水，將某一個(gè)池的透射比值調(diào)100%，測(cè)量其他各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，若超出此范圍應(yīng)考慮其對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響。

 

　　NanoDrop 2000分光光度計(jì)是有哪幾個(gè)部分組成的？

 

　　紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)是有哪幾個(gè)部分組成的？是很多朋友們想要知道的，業(yè)內(nèi)相關(guān)專家介紹，這種設(shè)備往往是有光學(xué)系統(tǒng)、電光系統(tǒng)、光電系統(tǒng)、電子系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)和輸出打印系統(tǒng)等部分組成。

 

　　光學(xué)系統(tǒng)：紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)這種部分系統(tǒng)又包括外光路系統(tǒng)和單色器兩個(gè)主要部分，其中外光路和單色器各有很多類型，單色器就是這種設(shè)備用于散光的主要來(lái)源，也是整機(jī)在使用時(shí)候主要分析誤差的來(lái)源之一。

 

　　電光系統(tǒng)：這種部分又包括鎢燈和相應(yīng)的電源組成，在該設(shè)備中對(duì)整體的穩(wěn)定性會(huì)有很大影響的，這種設(shè)備也是儀器不穩(wěn)定的主要原因之一。

 

　　光電系統(tǒng)：這種部分就是能夠?qū)⒐庑盘?hào)變?yōu)殡娦盘?hào)的關(guān)鍵部件，不但會(huì)直接影響到儀器的靈敏度和適用范圍，而且也有光電管、光電倍增管、硅光電池和二級(jí)管陣列等。

 

　　電子系統(tǒng)：這種部分主要有放大器、A/D變換器等組成，其中放大器就是影響整機(jī)靈敏度和穩(wěn)定性的主要部件，當(dāng)然了這種部件還是噪聲的主要來(lái)源，會(huì)直接影響到紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)設(shè)備的分析誤差。

 

　　NanoDrop 2000分光光度計(jì)原理 ：

 

　　分子的紫外可見(jiàn)吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見(jiàn)輻射光后，發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團(tuán)的信息。可以用標(biāo)準(zhǔn)光譜圖再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。

 

　　根據(jù)Lambert-Beer定律：A=εbc，（A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)，為液池厚度，c為溶液濃度）可以對(duì)溶液進(jìn)行定量分析。

 

　　你可以用紫外NanoDrop 2000分光光度計(jì)測(cè)定定三種農(nóng)藥的波長(zhǎng)在某溶液中的大、小吸收波長(zhǎng)。

 

　　配制溶液-在光譜檢測(cè)項(xiàng)下進(jìn)行-調(diào)整檢測(cè)光譜范圍及速度--掃描光譜圖--吸光度大處對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)為吸收波長(zhǎng)，吸光度小處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)為小吸收波長(zhǎng)。

 

　　NanoDrop 2000分光光度計(jì)種類繁多，但不外乎簡(jiǎn)易型、中檔型和型三大類。我們?cè)谶x用分光光度計(jì)時(shí)需要考慮以下幾個(gè)方面：

 

　　1.波長(zhǎng)檢測(cè)范圍，波長(zhǎng)選擇方式：越的儀器波長(zhǎng)檢測(cè)范圍越寬，當(dāng)然價(jià)格也較高，用戶需要根據(jù)自己的需求選擇合適的波長(zhǎng)范圍；對(duì)于簡(jiǎn)單型的儀器，波長(zhǎng)選擇方式一般是手動(dòng)查找，這種方式的重復(fù)性較差，型的儀器中波長(zhǎng)可以按照設(shè)定模式自動(dòng)查找或掃描，其次型的波長(zhǎng)掃描速度的檔位也會(huì)增加。

 

　　2.光束：光束類型分為單光束型，雙光束型或準(zhǔn)雙光束型。單光束一般適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度，不能作全波段光譜掃描，并且要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性；雙光束可以自動(dòng)記錄，快速全波段掃描?？上庠床环€(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析；假雙光束也就是比例雙光束，優(yōu)點(diǎn)是可以監(jiān)測(cè)光源變化帶來(lái)的誤差，它的原理是由同一單色器發(fā)出的光被分成兩束，一束直接到達(dá)檢測(cè)器，另一束通過(guò)樣品后到達(dá)另一個(gè)檢測(cè)器。但是這種方式并不能消除參比造成的影響。

 

　　3.光源：可見(jiàn)光區(qū)主要用鎢燈，鹵鎢（320～2500nm）；紫外區(qū)主要用氫燈，氘燈（180～375nm）；氙燈在紫外和可見(jiàn)光區(qū)均可用作光源。

 

　　4.樣品支架：簡(jiǎn)單的樣品支架為推拉式四聯(lián)池架，一次只能測(cè)量一個(gè)樣品，參比和樣品分兩次測(cè)量；型的樣品池支架為兩個(gè)固定式，分別是樣品通道和參比通道，可以同時(shí)測(cè)量參比和樣品的吸光值。

 

　　5.狹縫：簡(jiǎn)易型的狹縫一般是固定寬度模式，狹縫寬度多數(shù)為2nm,也有1.5nm的；型的儀器狹縫均為連續(xù)可調(diào)型，可以適應(yīng)高分辨率的需要。

 

　　6.光學(xué)性能指標(biāo)：光學(xué)性能的高低直接影響到測(cè)量的準(zhǔn)確性，其中光柵的技術(shù)指標(biāo)尤為重要。型儀器的光柵質(zhì)量較好，一般的光柵為凹面型，并且大尺寸的凹面光柵對(duì)應(yīng)的刻槽數(shù)越多，因此在分辨率和雜散光方面指標(biāo)要優(yōu)于簡(jiǎn)易型儀器。

 

　　7.檢測(cè)器：檢測(cè)器是利用光電效應(yīng)，將透過(guò)溶液的光信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，并將電信號(hào)放大的裝置。簡(jiǎn)易型儀器一般采用光敏二極管；中檔型儀器采用硅光二極管；型儀器的檢測(cè)器使用高靈敏度的光電倍增管和紅外檢測(cè)器。

 

　　8.顯示器：簡(jiǎn)易型儀器多為機(jī)械表頭或數(shù)碼管顯示器，沒(méi)有數(shù)據(jù)處理器；型儀器的顯示器為液晶式或連接電腦，數(shù)據(jù)處理可由儀器自身具有的或外接計(jì)算機(jī)處理。

 

　　9.測(cè)量模式：NanoDrop 2000分光光度計(jì)多為定點(diǎn)（固定波長(zhǎng)）吸光度或透過(guò)率測(cè)量方式，基本不能進(jìn)行波長(zhǎng)掃描測(cè)量；型儀器的測(cè)量模式較多，可以顯示透過(guò)率、吸光度、濃度直接讀數(shù)、單光束，單點(diǎn)及掃描均可。

 

　　10.測(cè)量附件：衡量?jī)x器質(zhì)量高低的重要方面是看儀器是否具有豐富的附屬測(cè)量器件，如偏振附件、積分球附件、反射附件、自動(dòng)進(jìn)樣器附件、色度分析軟件、薄膜附件。

 

　　11.測(cè)量樣品的狀態(tài)：可見(jiàn)和NanoDrop 2000分光光度計(jì)一般測(cè)量液態(tài)樣品，紅外分光光度計(jì)一般能分析各種狀態(tài)（氣、液、固）的試樣。